一、鱟試劑靈敏度的復(fù)核

為了保證檢查細(xì)菌內(nèi)毒素結(jié)果的準(zhǔn)確性，用于實(shí)驗(yàn)的鱟試劑應(yīng)首先核對靈敏度。因?yàn)閷?shí)際工作中，發(fā)現(xiàn)鱟試劑均符合藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)前提下，由于生產(chǎn)廠家不同，部分鱟試劑的實(shí)測靈敏度與標(biāo)示值有差異而導(dǎo)致檢測同一檢品時，用相同標(biāo)示值的鱟試劑，出現(xiàn)不同結(jié)果。鱟試劑靈敏度的復(fù)核是使用該鱟試劑的前提。中國藥典(2000版)在靈敏度復(fù)核項(xiàng)下規(guī)定,只有當(dāng)實(shí)測值λc在0.5λ~2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)時，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以λ為該批試劑的靈敏度，同時要求所用鱟試劑的靈敏度須小于供試品的內(nèi)毒素限值，因此靈敏度的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到判斷結(jié)果的正誤，應(yīng)盡量選用測定值與標(biāo)示值一致(λc =λb)的鱟試劑。有報道，用符合藥典規(guī)定的靈敏度標(biāo)示值相同的鱟試劑檢測同一檢品，結(jié)果因鱟試劑實(shí)測值與標(biāo)示值間存在差異而出現(xiàn)了兩種*不同的結(jié)果。因而先核對靈敏度可避免因鱟試劑本身造成的判斷失誤。

二、供試品的稀釋

在取樣品時，要熟悉中國藥典的內(nèi)容，不能直接取大輸液原液0.1ml進(jìn)行檢查，這是排除干擾因素的簡單有效的方法。因藥典已明確規(guī)定實(shí)驗(yàn)中鱟試劑的靈敏度不超過0.5EU/ml，根據(jù)供試品的稀釋公式:

供試品稀釋倍數(shù)=L/λ

L:供試品的內(nèi)毒素*

λ:鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值(EU/ml)。

故檢測大輸液均應(yīng)稀釋后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如選用更高靈敏度的鱟試劑，則應(yīng)增加樣品的稀釋倍數(shù)。稀釋用的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水藥典作了規(guī)定。在4h內(nèi)不得與鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)。如果直接用供試品原液實(shí)驗(yàn)，就會使供試品的內(nèi)毒素要求提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml 以下，這樣，根據(jù)目前大輸液的生產(chǎn)和貯藏條件，有些就會達(dá)不到，鱟法檢出的陽性率會提高，兔法復(fù)核的機(jī)遇也將增多，勢必會浪費(fèi)人力物力。

以前細(xì)菌內(nèi)毒素的限值是按照熱原檢查法所需的家兔劑量計算的，由于家兔劑量往往高于人用最大劑量的幾倍甚至幾十倍，勢必造成對產(chǎn)品內(nèi)毒素要求過于嚴(yán)格，使很多合格產(chǎn)品被判為不合格產(chǎn)品或使藥品生產(chǎn)成本增加，所以在USP和EP中，相繼采用人用最大劑量來計算藥品細(xì)菌內(nèi)毒素的限值。如注射用頭孢噻肟鈉按中國藥典(1995版)規(guī)定的熱原劑量計算其細(xì)菌內(nèi)毒素限值，與USP的限值要求相差4倍，而用最大劑量計算則兩者十分接近。

三、混合液的pH值

供試液與益試劑混合液的pH值對鱟實(shí)驗(yàn)的影響較大，根據(jù)國內(nèi)外資料的報道，實(shí)驗(yàn)的最適pH為6.25~7.25才能形成最佳凝膠。鱟試劑本身具有一定的緩沖能力。但pH值過大或過小均可抑制鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)，其原因可能是pH值過大或過小均可破壞極微量的內(nèi)毒素。

四、保溫溫度

溫度對鱟試劑的靈敏度影響很大，保溫溫度在25~40℃之間，隨著溫度的升高，鱟試劑的靈敏度亦增大，在40~46℃之間，溫度對益試劑的靈敏度無明顯影響，達(dá)到49℃或更高溫度時，則會破壞鱟試劑。故應(yīng)嚴(yán)格按照藥典的要求，溫度控制在(37士1)℃之間，才可獲得理想的結(jié)果。

五、振動的影響

鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素形成的凝膠受到振動后易變形而誤判為陰性。因此，在鱟實(shí)驗(yàn)過程中，不宜進(jìn)行容易引起試管振動的實(shí)驗(yàn)操作，實(shí)驗(yàn)用的試管架的眼孔直徑應(yīng)與安瓿或試管直徑相接近，避免安瓿或試管左右晃動。水浴箱要放置在固定不易受到振動的地方，保溫過程中不可隨時取出觀察。

六、所用器皿的影響

所用器皿均應(yīng)*洗凈和滅菌，實(shí)驗(yàn)用器皿均應(yīng)充分洗滌并沖洗干凈，特別是接觸酸堿或用洗衣粉、洗液等洗滌后，更應(yīng)沖洗干凈，以免殘留物破壞極微量的內(nèi)毒素。滅菌應(yīng)按藥典中的有關(guān)方法處理，防止引入外源性內(nèi)毒素。如有條件的話可用合格的細(xì)菌內(nèi)毒素快檢盒。

免責(zé)聲明：

本文節(jié)選自：《細(xì)菌內(nèi)毒素檢測中問題的研究》，文章作者：岳麗娜。如有侵權(quán)，請聯(lián)系刪除，謝謝！